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拟南芥液泡蔗糖转化酶基因沉默植物表达载体的构建(3)

时间:2018-03-26 17:29来源:毕业论文
1.2.4 反义RNA及Dicer等酶的简介 (1) 反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子。因为双链RNA不能被核糖体 翻译 ,所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合,即抑制了该mR



1.2.4 反义RNA及Dicer等酶的简介
(1) 反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子。因为双链RNA不能被核糖体翻译,所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合,即抑制了该mRNA的翻译。
(2) Dicer酶存在于细胞质中,具有RNaseIII活性的核酸内切酶,是一段在生物进化过程中非常保守的序列, 是具有同源序列的RNaseIII成员之一,在促使 dsRNA 裂解为siRNA 的过程中起到关键作用。

1.3 植物表达载体的构建的研究目的和意义
依赖于限制性核酸内切酶,DNA连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。
1.4 实验相关原理介绍
1.4.1 CTAB法原理(摘自百度百科)
CTAB法原理    CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性,阳离子表面活性剂,呈白色或浅黄色结晶体至粉末状。易溶于异丙醇,可溶于水,熔于热水、乙醇、三氯甲烷,微溶于丙酮,不溶于醚和苯。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

1.4.2 聚合酶链反应(PCR)原理(摘自百度百科)
PCR是一种非常有效的克隆已知基因的方法,它是模拟DNA体内复制原理的体外基因克隆技术[8]。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 源¥自%六^^维*论-文+网=www.lwfree.cn
但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本。
一些基于PCR 的克隆启动子技术,如载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR 等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法[9] 拟南芥液泡蔗糖转化酶基因沉默植物表达载体的构建(3):http://www.lwfree.cn/shengwu/20180326/11835.html
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